您好!欢迎访问内蒙古金源康生物工程有限公司官方网站!
新闻资讯
联系我们
咨询电话
0471-4105868
售后热线:
邮箱:591632103@qq.com
地址:呼和浩特市玉泉区裕隆工业园B区4号
当前位置:首页  > 新闻中心 > 公司新闻
金源康原创 | “认识”牛血清中的病原微生物
作者:admin 发布日期:2018/10/8 19:13:40
“医神”阿斯克勒庇俄斯从战争与智慧女神雅典那姑姑那里得到了威力比较大的一剂药——来自美杜萨血管里的鲜血。美杜萨是双翼蛇发女妖,她的血液有两面作用,要么置人于死地,要么解除人的病痛。这取决于血液来自她体内的何方。来自她身体左侧的一滴血会让人立刻毙命,而来自其身体右边的一滴血则可以奇迹般地让人死而复活。

新生牛血清作为疫苗生产过程中重要的原辅料,为细胞培养以及抗原增殖提供营养,同时也携带一些病原微生物对疫苗生产造成严重影响,具有安全风险。随着过滤除菌技术的快速发展,目前牛血清生产过程中可保证对细菌、真菌等的去除效果。但是病毒、支原体、噬菌体、黑胶虫等外源微生物,用简单的过滤方法无法祛除,犹如达摩克利斯剑时刻悬在生物制药企业头顶。想要对付它,首先我们得认识它,下面就让我们认识一下“美杜莎左侧一面血液”里的微生物。

1、病毒

病毒的形态各异,从简单的螺旋形和正二十面体形到复合型结构;病毒的大小也各异,最大的是痘病毒直径约300nm,最小的是圆环病毒直径17nm,一般病毒直径在100nm以内。正可谓不在五界内(原核生物、原生生物、真菌、植物和动物),身形多变幻。不过我们也有检测的“火眼金睛”:血吸附、细胞培养、酶联免疫、免疫荧光、血凝抑制、动物实验、透射电镜、基因芯片等方法都可以用来检测外源病毒,前面的几种方法传统、经济、认可度高,较为常用。




牛血清中污染了病毒,若所培养的细胞对此病毒敏感,会使细胞发生病变、死亡,后续工作无法进行。对于疫苗生产来讲,尤其是活疫苗,带入到最终产品的外源病毒将是毁灭性的灾难。所以,血清生产中的外源病毒必须确保可检可控、可灭活。

2、支原体
支原体(mycoplasma)为目前发现的最小的最简单的原核生物, 直径50-300nm,能通过除菌滤器, 没有细胞壁、可独立生活。支原体污染主要影响细胞的核酸合成,可能导致细胞染色体的异常和损伤,改变细胞的代谢、生长、形状、附着,影响细胞的基因表达,还可以导致MTT等细胞毒性实验结果严重错误。



牛血清中支原体污染率随着季节以及产地不同有较大差异,有的地区犊牛感染率可达30%,这和牧场防治措施也有一定关系。生产中未经过分类的血清精品支原体检出率约20%。人们常说的细胞株常见的支原体的污染中(1)M. orale、(2)M.Arginini、(3)M.Hyorhinis、(4)A.Laidlawii、(5)M.Fermentans、(6)M. salivarium、(7)M.pirum、(8)M. hominis、(9)M. agalactiae、(10)M.bovis、(11)M. buccale、(12)M. arthritidis、(13)M. pulmonis所占污染比例超过99%,前4位占比超过95%,牛血清中的支原体占比很少。但是不排除在牛血清生产过程中带入人的支原体。

轻度到中度的支原体污染不会明显改变细胞培养液的浑浊度和pH值,也不会导致细胞形态或生长速度的明显改变,支原体污染比较严重时可出现生长减慢,有的培养基pH明显变酸,并出现细胞病变,由此可依次对支原体污染进行检测。

3、噬菌体
噬菌体是一类特殊的病毒,大部分(超95%)为DNA病毒。之所以特殊是因为它专以细菌、真菌等微生物为宿主,较为人知的噬菌体是以大肠杆菌为寄主的T2噬菌体。噬菌体可分为温和噬菌体和烈性噬菌体。温和噬菌体在短时间内不能连续完成吸附、侵入、增值、成熟和裂解这五个阶段而实现繁殖,其基因组能与宿主菌基因组整合,并随细菌分裂传至子代细菌的基因组中,不引起细菌裂解。反之可连续完成的可裂解宿主菌的为烈性噬菌体。由此可见,我们在利用大肠杆菌做噬菌体检测时,是检测的可以吃掉细菌的烈性噬菌体。

4、黑胶虫
在组织培养中常观察到一种大小不等、形态不同的黑色运动颗粒,它对培养细胞的生长有不良影响,有时甚至导致细胞死亡,并能在一定条件下随培养时间的增长而增加其数量。人们常称这种颗粒为黑胶虫或中毒颗粒。直径约 0.5-1μm,显微镜观察为黑色,线状、杆状或椭圆形,不同人员观察到的形态不一致。显微镜下有典型的布朗运动(不规则的原地小距离抖动)。黑胶虫到底是什么业界目前没有一致的看法,甚至是不是微生物也有不同意见,有以下几种观点:

1. 寄生于牛血清内的原虫,和草履虫和变形虫有类似之处
2. 是在细胞培养时由于细胞凋亡产生的细胞碎片
3. 血清的聚合物,非活性微生物

也有一种观点,认为是玻璃瓶中类似氧化硅的物质,认为其无膜式结构,无蛋白质成分,中性环境下带正电荷,能谱扫描电镜分析为硅复合物,称之为硅小体,其增多主要来源于培养液对玻璃器皿的侵蚀。这个观点让卸下了血清背了多年的锅(个人对这种观点也比较认同)。无论如何,关于在细胞培养过程中遇到的“黑胶虫”问题,首先排除观察到的黑点不是细菌、真菌、支原体污染,或者细胞病变,然后再怀疑是不是所谓“黑胶虫”。