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细菌培养基是如何去灭菌,我们来了解一下
作者:admin 发布日期:2019/9/21 17:02:45
     培养基的灭菌方法主要有两种,高压除菌及过滤除菌。细菌培养基与过滤相比,高压灭菌的工作强度小,成本较低,但易造成营养成分的流失,而且在多次加样(无菌谷氨酰胺溶液,无菌碳酸氢钠溶液等)过程中容易造成二次污染。

     大多数培养基采用0.1~0.2μm孔径的微孔滤膜进行过滤灭菌,并且已成为培养基除菌的发展方向,它可低限度地减少培养基的营养损失。


细菌培养基


     1、高压灭菌

     某些培养基(如MEM)可进行高压灭菌,例如清大天一的MEM培养基中的MD605、MD609等。这类培养基一般不含有L-谷氨酰胺和碳酸氢钠,一般是在培养基高压灭菌后加入L-谷氨酰胺和碳酸氢钠的无菌的液体。另外可用耐高压的谷氨酸盐(如L-丙氨酰-L-谷氨酰胺)代替L-谷氨酰胺。可高压灭菌的培养基在121℃、15psi,15分钟的条件下完全可达到灭菌效果及营养成分的较小损失,不需将灭菌时间延长。为保证高压灭菌的效果,灭菌设备的验证很关键。

     2、过滤除菌

     目前培养工作中采用的培养用液包括人工合成培养液、消化用酶等,常含有维生素、蛋白质、多肽、生长因子等物质,这些物质在高温或射线照射下易发生变性或失去功能,因而上述液体多采用过滤消毒以除去细菌。可供过滤灭菌使用的滤膜很多,其材料多为polyethersulphone(PES)、尼龙、多聚碳酸盐、醋酸纤维素、硝酸纤维素、PTFE、陶瓷等。目前常用的滤器有Zeiss滤器、玻璃漏斗式滤器和针式微孔滤器。


细菌培养基灭菌


     其中,Zeiss滤器为不锈钢的金属结构,中间夹有一层石棉制成的一次性纤维滤板。滤板具有一定的厚度,可承受一定的压力,因此是过滤粘稠液体较理想的滤器。滤板有不同的规格,进口的型号为EKS,EKS2,EKS3等。国产的有甲1、甲2、甲3等,其中以EKS3及甲3过滤除菌的效果较好,但因孔径很小,过滤速度较慢。Zeiss滤器可分为抽滤式或加压式抽滤式滤器与抽滤瓶相连,真空泵抽气形成负压以过滤液体,其效率不如加压式。由于抽气造成负压抽吸,操作使用时要防止倒流而引起污染,因此要注意避免将出、入管道接错;停止抽气时应使用气体缓慢回流,要先用止血钳夹住抽气管再关机,防止气体回流。加压式滤器的容器为密闭式,加入待过滤的液体后,通以气体(常用N2、O2),形成压力将液体滤过,效果较佳。使用时注意压力不能过大,不应超过0.2kg/cm2。

     另外,由于使用的滤板为石棉,滤过的液体内有时可能混有少许杂质,因此细菌培养基在过滤前应先以少量生理盐水湿润滤板。Zeiss滤器的清洗比玻璃滤器简单,滤板属一次性,使用后即可弃去,以自来水将金属滤器初步冲洗,用洗涤剂刷洗干净,自来水冲净,蒸馏水漂洗2-3次,晾干包装。消毒前将滤板装好,旋钮不要拧得太紧,消毒后立即将旋钮拧紧以保证过滤除菌的效果。此外,也可在石棉滤板上加一层滤膜,以增加过滤效果。

此文关键字: 细菌培养基  
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